目的构建HBV临床分离株复制细胞系,为抗病毒药物筛选提供新的细胞模型。方法从乙型肝炎患者血清中PCR扩增乙肝病毒全长基因组,经SapI酶切,T4连接酶连接环化后作为模板,PCR扩增0.2拷贝HBV基因组（nt1402-nt1989）及1.0拷贝HBV基因组（nt1402-nt3215-nt1407）;依次克隆入pcDNA3（-）-EGFP-ΔCMV载体得到p1.2×HBV-EGFP质粒;用Lipofectamine 2000将重组质粒转染HepG2细胞,使用含G418（700μg/mL）培养基培养2～3周,挑选阳性克隆,进一步传代培养获得HBV复制细胞系（HepG2X15）。收集细胞系培养上清ELISA检测HBsAg和HBeAg水平;Real-time PCR检测HBV病毒含量。收集培养细胞,Southern blot检测细胞内HBV复制中间体;免疫荧光检测细胞内HBsAg和HBcAg。结果筛选出1株来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,在培养上清中检测到高水平HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体,免疫荧光检测到细胞内高水平HBsAg和HBcAg。与HepG2.2.15细胞系相比,上清中HBsAg和HBV DNA水平更高。结论成功建立来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,该细胞系稳定表达HBsAg、HBeAg和HBcAg,并支持高水平的HBV复制,可以用于抗HBV药物筛选及临床分离株的耐药机制等研究。