目的构建携带增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）标志针对大鼠诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因的shRNA重组腺病毒载体并在人胚肾-293细胞中扩增制备重组病毒。方法利用AdMax包装系统,用先期构建的带有EGFP标记基因的穿梭质粒pDC316-iNOS-shRNA-EGFP,与骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染293包装细胞,同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-inosshRNA-EGFP,反复感染293细胞扩增病毒后,离子交换法纯化病毒,并测定病毒颗粒数及滴度。结果经聚合酶链反应（PCR）检测和EGFP表达证明已成功构建了携带iNOS-shRNA-EGFP的重组腺病毒载体;扩增纯化后,测得重组腺病毒颗粒数为3.6×1011VP/ml,A260/A280值约为1.25,病毒活性为7.94×109IU/ml。结论已成功构建重组腺病毒载体Ad5-inos-shRNA-EGFP,为利用基因激活技术治疗勃起功能障碍的研究奠定实验基础。