目的:探讨靶向大鼠iNOS基因的shRNA重组腺病毒载体对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞iNOS基因的激活作用,为阴茎勃起功能障碍（ED）的基因治疗提供实验依据。方法:将前期构建的重组腺病毒Ad5-iNOSrshRNA-EGFP（AdU6/shiNOS）和对照病毒AdU6/shControl,分别转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,分别在不同病毒MOI（25,50,75）值下72小时后采样检测。采用realtime RT-PCR半定量检测AdU6/shiNOS对细胞iNOS基因mRNA表达影响;Western-blot法检测海绵体平滑肌细胞iNOS蛋白表达变化。然后培养基中加LArg（10mmol/L）,用酶联免疫法检测病毒转染72小时后海绵体平滑肌细胞内cGMP的浓度变化,记录AdU6/shiNOS对平滑肌细胞内cGMP的影响。结果:AdU6/shiNOS转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞72小时后,和空白对照组、阴性对照组相比iNOS基因在mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P(0.05）,呈剂量依赖性,MOI=75时RNAa效果最好。而且转染72小时后,实验组原代平滑肌细胞内cGMP水平显著高于对照组及空白组（P(0.05）。结论:利用腺病毒介导的RNAa技术,提高海绵体平滑肌细胞iNOS基因表达获得成功,可以增加阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平,激活了NO/cGMP通路,这为勃起功能障碍的基因治疗研究开辟了新的方向。