目的比较四种方法所提取的人脐带间充质干细胞细胞外囊泡（EV）的效率。方法收集人脐带间充质干细胞的培养基上清液,通过差速离心法（方法A）、超滤结合差速离心法（方法B）、超滤结合聚乙二醇沉淀法（方法C）、超滤结合水两相系统法（方法D）提取EV。利用二辛可宁酸（BCA）蛋白浓度测定试剂盒检测各组EV的总蛋白浓度, Western blot法检测EV表面标志物凋亡关联基因2相互作用蛋白X（Alix）、 CD9与阴性对照钙连蛋白（calnexin）,透射电镜检测EV的形态,纳米颗粒跟踪分析检测EV的粒径分布与颗粒数。结果以上四种方法提取的EV蛋白含量分别为（1.92±1.77）μg/μL、（18.10±1.07）μg/μL、（6.33±1.02）μg/μL、（36.48±23.13）μg/μL。A、 B、 C三种方法所分离的EV的CD9、 Alix均呈阳性,其中方法C的表达量最低;阴性蛋白calnexin均呈阴性。方法D所得EV检测CD9、 Alix、 calnexin均呈现阴性。A、 B、 C三种方法提取的EV颗粒数分别为0.85×1011/mL、 0.63×1011/mL、 1.83×1011/mL,且粒径分布均符合细胞外囊泡的粒径范围。透射电镜检测A、 B、 C三种方法所提EV均有典型的杯托状膜结构。结论超滤结合差速离心法可应用于对EV需求量大的实验。若EV需求量小,则建议直接使用差速离心法,降低EV破碎的风险。