目的构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系。方法常规分子克隆方法结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以PacⅠ线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9。CsCl密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,Annexin V/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3+T细胞的比例。结果重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3+T细胞的比例。结论重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pAd-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达。