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LRIG3基因特异性siRNA腺病毒表达载体的构建与鉴定

The Construction and Identification of siRNA Adenovirus Expression Vector Targeting LRIG3 Gene

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资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科
出处:
ISSN:

关键词: LRIG3基因 RNA干扰 腺病毒载体 膀胱癌

摘要:
目的构建并鉴定针对LRIG3基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具。方法设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3。鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3。大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。pAd-LRIG3感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达。结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA序列。pAd-LRIG3可抑制LRIG3 mRNA的表达。结论含有LRIG3-siRNA的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA表达的功能。

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第一作者:
第一作者单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科
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