摘要:
目的构建并鉴定针对LRIG3基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具。方法设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3。鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3。大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。pAd-LRIG3感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达。结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA序列。pAd-LRIG3可抑制LRIG3 mRNA的表达。结论含有LRIG3-siRNA的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA表达的功能。