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用多糖-破伤风类毒素结合苗制备抗流行性脑膜炎球菌多糖单克隆抗体

Preparation of Monoclonal Antibody Against Neisseria Meningococcal Serogroup A Polysaccharide (GAMP) by Using the Conjugate Vaccine of both GAMP and Tetanus Toxoid

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收录情况: ◇ 统计源期刊

单位: [1] 武汉大学第一临床学院药剂科 [2] 华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心
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关键词: 菌苗 多糖抗体 A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖 结合苗 单克隆抗体

摘要:
目的研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体(GAMP mAb)。方法以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(GAMP-TT)耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株(2E7)。采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定。结果所获得的杂交瘤细胞(2E7)具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.762.32 mg.mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1:25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性。结论成功制备抗GAMPmAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础。

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第一作者:
第一作者单位: [1] 武汉大学第一临床学院药剂科
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