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染色质免疫共沉淀技术在前列腺癌细胞株中的优化

Optimation of chromatin immunoprecipitation technology in prostate cancer cells

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收录情况: ◇ 北大核心 ◇ CSCD-E ◇ 中华系列

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科湖北省泌尿外科研究所
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关键词: 前列腺癌 染色质免疫共沉淀

摘要:
目的优化染色质免疫共沉淀技术(ChIP)的关键条件,以期提高实验效率。方法拟以前列腺癌细胞株PC-3、DU145为实验材料,主要对裂解液体积、超声波的功率、脉冲及工作时间等方面进行调整,超声波破碎仪设置不同的条件(25%或30%功率,35 s或50 s间隔,3 s或5 s工作时间),然后解交联富集这些DNA片段,测定其浓度及纯度值,分别行聚合酶链反应(PCR)并用2%琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果前列腺癌细胞株合适的ChIP实验条件为:(1)超声波最大功率为30%,设定每38 s行3 s或55 s行5 s超声工作时间,总的时间4575s;(2)纯化后的DNA浓度)10 ng/μl、纯度值(A260/A280))1.45,可以得到比较好的实验结果。结论在前列腺癌细胞株PC-3、DU145中,选定合适的超声波频率后,总的超声工作时间为60 s时,便可得到合适的DNA片段;洗脱液体积固定后,分2次离心要比1次离心所得到的DNA纯度值高,所得到的实验结果也越明显。

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第一作者:
第一作者单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科湖北省泌尿外科研究所
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