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当前专利权人：
华中科技大学同济医学院附属同济医院
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摘要：
本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种新型冠状病毒2019‑nCoV双通道实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法。本发明采用单管双荧光通道同时检测新型冠状病毒2019‑nCoV和内参基因Rnase P的存在，能检测肺泡灌洗液、鼻咽拭子、全血、血清、粪便和组织等标本中新型冠状病毒2019‑nCoV RNA的存在。本发明检测时间周期短，适用于临床和床旁的快速检测诊断；检测病毒特异性高，准确率高；在进行病毒定性分析、定量分析，定量线性范围好；检测灵敏度高；实验结果重复性好，精密度高；检测体系中加入了内参基因，能通过内参基因的检测结果对样本的提取和扩增整个过程进行质量监控。
主权项：
1.一种新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括：实时荧光定量PCR检测引物如SEQ ID NO.1-2所示及其探针如SEQ ID NO.3所示；以及内标基因Rnase P特异性引物如SEQ ID NO.4-5所示、及其探针如SEQ ID NO.6所示；且所述新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测试剂盒的反应体系为：RNA模板5μl；新型冠状病毒2019-nCoV特异性荧光探针10μmol/L，1μl；新型冠状病毒2019-nCoV特异性上游引物10μmol/L，0.75μl；新型冠状病毒2019-nCoV特异性下游引物10μmol/L，0.75μl；Rnase P特异性荧光探针10μmol/L，0.5μl；Rnase P特异性上游引物10μmol/L，0.5μl；Rnase P特异性下游引物10μmol/L，0.5μl；5×PCR buffer，5μl；Enzyme Mix，5μl；超纯水或Rnase Free H 2 O 6μl；其中，所述5×PCR Buffer的配方为：20mM Tris·Cl，80mM KCl，80mM(NH 4 ) 2 SO 4 ，1.5mMDTT；12mM MgCl 2 ，10mM dNTP，2.5mM dUTP，0.5μM随机六聚体引物；0.25μM Oligo dT；所述Enzyme Mix的配方为：20mM Tris·Cl，80mM KCl，1mM DTT；0.1mM EDTA，0.5％Nonidet P-40，0.5％Tween 20；50％甘油，20U/μl RNA酶抑制剂；2U/μl UNG酶，200U/μl高效逆转录酶；快速Taq酶2.5U/μl。
