摘要:
直接从ES-D3胚胎干细胞(ESC)诱导分化出胚胎干细胞源性树突状细胞(esDC)。ESC单细胞悬液在低黏附性培养皿中悬浮培养形成拟胚体(EB)。取第14天的EB用含重组鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组鼠白细胞介素3(rmIL-3)的培养基在高黏附性组织培养瓶中培养10 d,消化细胞后传代培养。运用流式细胞仪检测细胞表面CD11c、MHCⅠ、MHCⅡ、CD86、CD80、CD83的表达情况。同时,运用脂多糖(LPS)刺激诱导细胞,观察其细胞形态学及MHCⅡ、CD80分子表达变化,并利用混合淋巴细胞培养观察其对同种淋巴细胞的刺激能力。结果显示在rmGM-CSF和rmIL-3细胞因子的作用下,EB在培养第4天开始出现大量早期的esDC,在接下来的培养中细胞大量扩增,常规消化后细胞保持很高的增殖活性并可传代培养。这些细胞表达高量的CD11c、低量的MHCⅠ,而不表达CD86、CD80、CD83及MHCⅡ。但当用LPS刺激作用后,该类细胞表现出成熟DC的细胞形态并上调MHCⅡ、CD80分子,并产生对同种淋巴细胞强烈的刺激作用(P(0.01)。因而,运用EB联合细胞因子rmGM-CSF和rmIL-3能从ESC中直接诱导分化出esDC。