摘要:
目的观察pEGFP-survivin对GBC-SD细胞化疗敏感性的影响。方法以MTT法检测GBC-SD、GBC-SD/EGFP和GBC-SD/survivin三种细胞的增殖活性;用RT-PCR和Western印迹、检测各组细胞中survivin mRNA和蛋白质水平的表达;以合适浓度的DDP作用相同的时间后,用MTT法检测3种细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡,并用MTT法筛选IC50值,TUNEL法观察细胞核改变;另外检测DDP作用后各组细胞的caspase-3蛋白酶活性的变化。结果 GBC-SD和GBC-SD/EGFP细胞的增殖活性大致相同,而GBC-SD/survivin细胞的增殖活性则明显下降;RT-PCR和Western印迹均发现GBC-SD/survivin细胞中的survivin表达水平较其余两种细胞明显下降;在给与DDP作用后,GBC-SD/survivin细胞存活率和IC50明显较低,细胞凋亡率较高,而3种细胞用TUNEL法染色后均可见棕色凋亡细胞核。给与DDP作用后,各组细胞caspase-3活性均呈现先升高后下降的趋势,但GBC-SD/survivin细胞中caspase-3的活性明显高于另外两种细胞。结论 pEGFP-survivin表达的survivin shRNA能明显降低GBC-SD细胞中survivin的表达,提高对化疗药物的敏感性。