摘要:
目的观察高表达人Salvador1(hSav1)蛋白对人胚肾293(HEK293)细胞增殖的影响。方法构建含有绿色荧光蛋白(GFP)的hSav1质粒GFP-N1-hSav1;将构建好的GFP-N1-hSav1质粒在脂质体Lipofectamine2000的介导下转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察质粒转染效率;分别在转染后12、24、36、48 h通过噻唑蓝(MTT)比色法计算细胞增殖抑制率,抑制率=[(对照-空白)-(给药-空白)]/(对照-空白)×100%;转染后36 h加入5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU),通过其掺入比率来显示hSav1对细胞增殖的影响。结果质粒GFP-N1-hSav1构建成功,转染效率为70%~80%左右,蛋白hSav1明显高表达;MTT结果显示转染质粒后12、24、36、48 h,高表达蛋白hSav1组的细胞增殖抑制率分别为2%、5%、15%、23%,而阴性对照分别为2%、3%、2%、2%;BrdU结果显示,在HEK293细胞中高表达蛋白hSav1后细胞增殖抑制率为(27.3±3.8)%,阴性对照组的细胞增殖抑制率为(12.9±5.3)%,差异有统计学意义(P(0.05)。结论在人胚肾HEK293中高表达蛋白hSav1可明显抑制细胞增殖能力。