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小鼠纤维介素蛋白2微小RNA表达质粒的构建及其对体内外相应基因的干预效应

Construction and inhibition effect of miRNA against mouse fgl2

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收录情况: ◇ 统计源期刊

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院感染免疫研究所 [2]华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科
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关键词: 重型肝炎 RNA干扰 纤维介素蛋白2 微小RNA

摘要:
目的:探讨小鼠纤维介素蛋白2(fgl2)的miRNA(微小RNA)表达质粒在体外对相应基因表达的干预效应及在体内对重型肝炎小鼠的治疗作用。方法:分别构建产生小鼠fgl2-miRNA的表达载体(P-mfgl2-miRNA),将其转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中。实验分组:将P-mfgl2-miRNA与小鼠fgl2的表达质粒(pcDNA3.1-mfgl2)共转染到CHO细胞作为干预组,无关序列miRNA表达质粒(irrelevant P-miRNA)与pcDNA3.1-mfgl2共转染为非相关对照组,仅转染pcDNA3.1-mfgl2为阳性对照组,未转染任何质粒为空白对照组。通过实时荧光定量PCR及Western blot观察fgl2在基因转录水平及蛋白水平表达量的改变。建立重型肝炎小鼠模型,通过尾静脉高压注射P-mfgl2-miRNA者为治疗组,注射irrelevant P-miRNA者为非相关组,注射相同剂量生理盐水者为阴性对照组,观察P-mfgl2-miRNA对重型肝炎小鼠的治疗作用。结果:成功构建了针对小鼠fgl2的miRNA。在CHO细胞中,干预组fgl2在RNA水平及蛋白水平的表达均较非相关对照组显著降低。P-mfgl2-miRNA可提高重型肝炎小鼠生存率至8.3%。结论:Fgl2可作为重型肝炎基因治疗的靶点,利用miRNA沉默fgl2基因将有利于重型肝炎的治疗,为后续的进一步研究奠定了基础。

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第一作者:
第一作者单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院感染免疫研究所
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