摘要:
目的构建色氨酸羟化酶(TPH)-2基因小干涉RNA的重组慢病毒载体。方法在TPH-2 mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体,获得重组质粒pU6-MCS-CMV-TPH2-shRNA,后者与慢病毒试剂共转染293细胞,同源重组产生Lentivirus-TPH2-siRNA。经聚合酶链反应(PCR)鉴定目的基因的表达并测定病毒滴度。结果 PCR表明Lentivirus-TPH2-siRNA构建正确,病毒滴度为3×108TU/ml。结论获得的Lentivirus-TPH2-siRNA可以用于转基因瘙痒治疗的实验研究。