摘要:
目的筛选更多的对小分子双链RNA(dsP21-322)介导抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效应的人类细胞系,并初步研究该过程是否依赖p53的表达。方法选择4种表达不同类型p53蛋白的人类细胞系,p53野生型(p53wild type)的人骨肉瘤细胞系U2-OS、人肾上皮细胞系293T,p53突变型(p53mutant type)的人宫颈癌细胞系HeLa及p53缺失(p53null)的人肺腺癌细胞系NCI-H1299,转染dsControl(阴性对照)或dsP21-322至以上细胞,RT-qPCR和Westernblot分别检测p21、p53mRNA和蛋白表达的变化。结果 dsP21-322的转染未明显影响上述细胞系p53的表达;而在U2-OS、HeLa和293T细胞系中均能激活p21的表达,相比dsControl,分别上调p21mRNA的表达3.97倍、4.94倍和4.64倍,Western blot进一步证明在这3种细胞系中p21蛋白表达水平的增加与p21mRNA水平的上调相一致,且与dsControl组相比,差异均有统计学意义(均P(0.05)。但是在p53缺失的NCI-H1299细胞系中,dsP21-322则不能上调p21的表达。结论 dsP21-322介导p21激活现象存在于人类细胞,而其未能上调p53缺失细胞系中p21的表达是否提示该过程可能依赖p53的表达尚有待进一步研究。