摘要:
目的观察内源生大麻素(AEA)对血吸虫肝纤维化小鼠原代肝星状细胞(HSC)增殖及磷酸化Erk(P Erk)的影响,为大麻素在肝纤维化领域的研究提供理论依据。方法(1)腹部皮肤贴敷尾蚴建立血吸虫肝纤维化模型;(2)HE和Masson染色证实肝纤维化形成;(3)非连续密度梯度离心法提取原代HSC;(4)α平滑肌肌动蛋白(-SMA)和结蛋白免疫荧光双重染色鉴定原代HSC;(5)二甲基偶氮唑盐法检测AEA对HSC增殖的影响;(6)Western blot检测AEA对HSC磷酸化-Erk表达的影响。多个样本的均数比较采用单因素方差分析,若方差齐则采用LSD检验,若方差不齐采用Dunnett T3检验。结果(1)成功建立血吸虫肝纤维化模型:HE染色显示嗜酸性肉芽肿形成,Masson染色显示出现围绕血管的胶原纤维沉积;(2)成功提取高纯度的原代HSC:纯度约为95%;(3)AEA能呈浓度依赖性地抑制HSC的增殖:5、10、20、40、60、80、100、120μmol/L组AEA对HSC的抑制率分别为5.14%±1.61%、10.34%±3.22%、14.12%±3.98%、18.64%±3.67%、23.86%±3.06%、62.81%±7.75%、70.39%±7.11%、72.31%±6.71%;(4)AEA能呈浓度和时间依赖性地增加P Erk的表达:20、60、120μmol/L组的平均灰度值分别为39.90±4.61、43.45±0.91、52.91±1.97,与阴性对照组(19.21±1.60)相比,P值均(0.05;在15、30 min,1、3、6、12、24、48 h的平均灰度值分别为85.05±15.80、103.41±11.89,118.02±12.24、109.17±15.69、100.86±10.55、71.70±12.87、34.62±14.85、22.84±11.73,与阴性对照组(19.21±1.60)相比,在15、30min,1、3、6、12 h,6个时间点比较,P值均(0.05。结论内源性大麻素AEA能通过激活Erk信号通路,抑制血吸虫肝纤维化小鼠原代HSC的增殖。