资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-E
文章类型：
单位：
[1] 武汉科技大学医学院公共卫生学院
[2] 华中科技大学同济医院血液科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
血液内科
[3] Department of Obstetrics & Gynecology,Virginia Commonwealth University
出处：
ISSN：
关键词：
S-Sox5基因
基因打靶载体
DNDF7载体
LPL4载体
摘要：
目的体外实验已证实S-SOX5蛋白转录调节运动纤毛基因Spag6,为进一步探索其在体内的作用,拟构建S-Sox5基因的敲除载体。方法利用新型DNDF-7和携带LoxP位点的LPL4载体,选择S-Sox5基因第1外显子作为条件性敲除目的片段,SV129系ES细胞DNA为模板分步扩增包括S-Sox5第1外显子的中间段（middle piece）,上游同源左臂4.8kb（upper arm）及下游同源右臂2.5kb（down arm）的基因片段;构建upper-arm-DNDF7、down-armDNDF7和middle-piece-LPL4质粒,将middle-piece-LPL4的酶切产物LoxP-middle-piece-LoxP和down-arm-DNDF7酶切产物相连,形成携带LoxP位点的middle-down-arms-DNDF7重组质粒,该质粒与upper-arm-DNDF7酶切产物相连,获得S-Sox5基因打靶载体。结果经酶切鉴定及测序证实,构建的upper-arm—DNDF7、middle-piece—LPL4、down-arm—DNDF7重组质粒和S-Sox5基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建小鼠S-Sox5条件基因打靶载体,为进一步建立S-Sox5条件敲除小鼠,在体内研究其功能打下基础。
基金：
国家自然基金青年基金项目(81300536,81571428,81502792)%湖北省卫生厅项目青年基金(WJ2015Q026, QJX2012-22)
第一作者：
第一作者单位：
[1] 武汉科技大学医学院公共卫生学院
推荐引用方式(GB/T 7714)：
刘晙玭,汪智琼,平光伦,等.利用新型DNDF7和携带LoxP位点的LPL4质粒快速构建S-Sox5基因打靶载体[J].中国男科学杂志.2015,29(09):7-13.
