目的探索Toll样受体（Toll like receptor,TLR）-3和-4在骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成软骨分化过程中对蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白形成的影响及机制。方法用Ficoll密度梯度离心法分离SD大鼠BMSCs,并进行传代扩增。流式细胞术检测细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90的表达进行细胞鉴定。以Western blot法检测第3代细胞的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。再随机分为空白组、TLR-3激活组、TLR-4激活组,分别以PBS、TLR-3激动剂、TLR-4激动剂处理后,进行成软骨诱导培养。培养第14天,以阿利新蓝染色检测蛋白多糖,以免疫荧光及Western blot法检测Ⅱ型胶原的表达,以实时荧光定量PCR检测Sox-9的表达。结果 Ficoll密度梯度离心法分离所得细胞,其表面标志物表达为CD34（-）、CD44（+）、CD54（+）、CD90（+）,符合BMSCs特点。分组处理前,BMSCs不表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原。经过2周成软骨诱导培养,空白组、TLR-3激活组和TLR-4激活组阿利新蓝染色均为阳性,且3组间无明显差异。免疫荧光及Western blot结果显示,3组均表达Ⅱ型胶原,但空白组表达明显低于TLR-3激活组和TLR-4激活组,且TLR组间无明显差异。PCR结果显示,TLR-3和TLR-4激活组Sox-9相对表达量较空白组增高1倍,而TLR组之间无明显差异。结论经过成软骨诱导培养,BMSCs能够形成基质蛋白多糖及Ⅱ型胶原,初步具有软骨细胞特性。TLR-3和-4对基质蛋白多糖的形成无明显作用,却能够促进Ⅱ型胶原的形成,其机制可能与TLR-3和-4对Sox-9的上调有关。