资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-E
文章类型：
单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院胸外科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
外科学系
胸外科
[2] 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所
华中科技大学同济医学院附属同济医院
胃肠肿瘤研究所
[3] 华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
外科学系
胃肠外科
出处：
ISSN：
关键词：
p55PIK
稳定细胞系
LoVo细胞
细胞周期
DNA合成
摘要：
目的构建p55PIK高表达的质粒,筛选稳定高表达p55PIK的LoVo细胞系,检测其对LoVo细胞周期的影响。方法以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,通过限制性核酸内切酶进行酶切,T4DNA连接酶将目的片段插入pcDNA3.1质粒中;将携带p55PIK基因的pcDNA3.1质粒转染LoVo细胞,加入适量的G418筛选（500μg/mL）,并通过实时定量PCR（qPCR）和Western blot方法检测p55PIK mRNA水平和蛋白水平,进一步通过BrdU/PI掺入法检测p55PIK对LoVo细胞周期和DNA合成的影响。结果成功构建了p55PIK高表达的质粒,并筛选出稳定高表达p55PIK的LoVo细胞系;在LoVo细胞中高表达p55PIK能够促进细胞S期的进程和DNA的合成。结论成功构建了pcDNA3.1-p55PIK质粒,并筛选出p55PIK稳定高表达的LoVo细胞系,高表达p55PIK能够促进LoVo细胞S期的进程和DNA的合成。
基金：
国家自然科学基金资助项目(81301899,81372662)
第一作者：
第一作者单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院胸外科
推荐引用方式(GB/T 7714)：
曹小年,胡发涌,杨熹,等.高表达p55PIK细胞株的建立及其对结肠癌LoVo细胞周期的影响[J].华中科技大学学报(医学版).2016,45(02):128-131.
