摘要：
目的 探讨亲嗜性病毒整合位点1(EVI1)对微小RNA-9(miR-9)的调控作用和机制及对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响及机制,研究EVI1参与髓系白血病的分子机制.方法 首先使用MSCV-EVI1及MSCV-vector制备反转录病毒并感染Uocm1细胞系,比较EVI1过表达后miR-9表达水平,miR-9启动子序列甲基化程度及EVI1过表达对细胞周期和克隆形成能力的影响;然后使用去甲基化药物地西他滨以0.1μmol/L浓度处理EVI1过表达的Uocm1细胞,以逆转miR-9启动子过度甲基化,研究恢复miR-9表达对细胞周期和增殖能力的影响.结果 相对于空载体组,过表达EVI1可以显著下调miR-9表达水平:对照组相对表达量为0.006±0.001,而EVI1过表达组相对表达量为0.004±0.000(t=4.09,P<0.05),并且miR-9启动子序列出现过度甲基化现象;EVI1过表达组的Uocm1细胞较空载体组Uocm1细胞克隆形成能力增强(对照组122.3±7.8,空载体组45.7±6.1)(t=-13.44,P<0.01),EVI1过表达组细胞中S期、G2期比例增高(均P<0.05),而G0/G1期细胞比例降低(P<0.05).相对于对照组,0.1μmol/L地西他滨可显著降低EVI1引起的miR-9启动子过度甲基化,恢复miR-9的表达(P<0.01);G0/G1期细胞比例在对照组为(48.25±2.19)％,地西他滨组为(65.9±2.90)％(t=-6.85,P<0.05);对照组细胞集落数为123.40±8.12,而地西他滨组仅为51.00±10.01(t=9.59,P<0.01),提示地西他滨可通过G0/G1期阻滞遏制细胞增殖.结论 EVI1通过诱导miR-9启动子过度甲基化下调miR-9表达可能是EVI1参与髓系白血病的机制之一;地西他滨能降低miR-9启动子甲基化水平,逆转EVI1对miR-9的负向调控,为其用于EVI1高表达急性髓系白血病的治疗提供了理论依据.
