摘要：
目的 比较不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)直接转化为诱导型神经干细胞(induced neural stem cells,iNSCs)的效率,以进一步优化诱导方法.方法 构建慢病毒表达载体pLenti6.3-Sox2-IRES2-EGFP,分别采用单转录因子Sox2、小分子物质、转录因子Sox2联合小分子物质共同作用三种方法将MEFs直接转化为iNSCs.qPCR检测神经干细胞的标志基因和多潜能标志基因的表达.免疫荧光检测神经干细胞的标记物nestin,计算iNSCs的转染效率.iNSCs在分化培养基中贴壁培养7～14d,免疫荧光分别检测神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的细胞标记物MAP2、GFAP和Olig2的表达.结果 诱导后4～6d,MEFs的形态发生明显改变.免疫荧光显微镜下的结果显示诱导因子Sox2加小分子的诱导方法较单独使用Sox2和单独使用小分子物质进行诱导的效率高,差异具有统计学意义(P＜0.05).qPCR的结果证明,3组iNSCs多种神经干细胞的标志基因(Sox2、nestin、Blbp、Pax6)的表达均较MEFs明显增高,3组间差异无统计学意义(P＞0.05);共聚焦显微镜的结果证明3种方法诱导的iNSCs具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 转录因子Sox2联合小分子共同作用可显著提高MEFs转化为iNSCs的效率且并不改变iNSCs的细胞功能特点.3组的iNSCs均具有神经干细胞自我增殖和多向分化的能力.
