摘要：
目的 探讨腺病毒携带的黑色素瘤分化相关基因-7(Ad.mda-7)调节胆囊癌细胞生长抑素受体-2(SSTR2)基因表达对胆囊癌细胞SGC-996生长及细胞周期的影响.方法 构建携带MDA-7/白细胞介素(IL)-24基因的腺病毒载体,转染胆囊癌细胞SGC-996,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测胆囊上皮细胞、胆囊癌细胞实验组细胞增殖率,观察各实验组细胞增殖抑制的变化、FCM流失细胞术分析各实验组细胞周期特异性.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Ad.mda-7转染后,各实验组细胞MDA-7、SSTR2基因的表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测p21、Cyclin A、CDK2、Cyclin B蛋白等细胞周期蛋白(Cyclin)及蛋白激酶B(Akt)细胞通路蛋白的表达.结果 Ad.mda-7可以有效转染胆囊癌细胞SGC-996及胆囊NF细胞,稳定表达MDA-7的mRNA及蛋白.转染MDA-7基因后,胆囊癌细胞SGC-996组细胞存活率[(43.48±9.75)％]低于空白对照组[(89.16±7.85)％]和阴性 Ad.vec 对照组[(87.97±8.63)％],Ad.mda-7 明显受到抑制SGC-996组细胞存活率(P＜0.05).流式细胞仪检测Ad.mda-7作用胆囊癌各实验组细胞24 h后细胞周期变化,Ad.mda-7 SGC-996细胞组G2/M期[(49.62±3.12)％]高于于空白组[(13.54± 1.13)％]、阴性Ad.vec对照组[(15.39±6.04)％],Ad.mda-7 SGC-996实验组细胞周期被阻滞于G2/M期(P＜0.05).Western blot进行蛋白定量分析,Ad.mda-7转染后胆囊癌SGC-996细胞后,实验组SSTR2蛋白表达上调,p21、Cyclin A、CDK2、Cyclin B蛋白表达逐渐增加,而Cyclin D1、CDK4、Cyclin D3、CDK6蛋白的表达逐渐减少,诱导肿瘤细胞细胞周期被阻滞于G2/M期.同时,Akt、ERK蛋白的表达呈明显增加,实验组p-Akt、p-ERK、p-JNK蛋白表达量明显下降.结论 Ad.mda-7转染胆囊癌细胞SGC-996后,明显抑制肿瘤细胞的生长,Ad.mda-7上调SSTR2蛋白的表达,并且通过上调细胞内Akt信号通路蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的生长.
