摘要：
目的 探究N-乙酰转移酶10(NAT10)对Erastin诱导结直肠癌(CRC)细胞铁死亡敏感性的影响及其机制.方法 使用公共数据库明确NAT10在CRC中的表达及其与Erastin利用度的关系;应用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)探索Erastin对NAT10 mRNA表达的影响;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测NAT10抑制剂Remodelin联合Erastin对CRC细胞SW620活力的影响.构建NAT10稳转敲低细胞株,蛋白质印迹法(Western blot)验证敲减效率成功后,进行RNA-Seq和ac4C-RNA-Seq的测序,分析与对照组比较,NAT10敲低组出现ac4C修饰水平降低和mRNA表达水平下降的基因,再和铁死亡抑制因子集取交集,最后筛选出NAT10调控铁死亡的潜在下游靶基因.RT-qPCR或Western blot检测对照组和NAT10敲低组或Remodelin处理细胞中的转录调节因子核蛋白1(NUPR1)表达水平,验证NAT10对NUPR1的调控作用.两组间比较采取t检验.结果 NAT10表达越高,Erastin的药物利用度越低(R=-0.16,P＜0.05),SW620细胞Erastin作用组响应性升高(1.440±0.035 比 1.000±0.096,t=-7.423,P＜0.05),Remodelin+Erastin 组细胞活力明显低于 Erastin 组(0.293±0.017 比 0.906±0.048,t=60.680,P＜0.05).通过铁死亡抑制剂 Fer-1 干预实验,Fer-1+Erastin+Remodelin细胞组比Erastin+Remodelin组比较,细胞活力出现下降(0.489±0.011 比 0.412±0.036,t=3.599,P＜0.05).成功构建 NAT10 稳转敲减细胞系(1.105±0.065 比0.309±0.104,t=11.220,P＜0.05),测序结果联合铁死亡数据库抑制基因集筛选出NUPR1是NAT10调控铁死亡的下游潜在靶基因.公共数据库证实NAT10与NUPR1呈明显正相关(R=0.40,P＜0.05).RT-qPCR证实NUPR1的mRNA表达在NAT10敲低组中低于对照组(0.087±0.007比0.198±0.005,t=20.758,P＜0.05).Western blot 结果表明用 Remodelin 抑制 NAT10 表达后,NUPR1在SW480和SW620实验组中蛋白表达水平低于对照组(SW480:0.611±0.175比1.245±0.350,t=6.267,P＜0.05;SW620:0.745±0.230 比 1.201±0.343,t=6.826,P＜0.05).结论 结肠癌SW620细胞系中NAT10在Erastin作用下响应性升高,NUPR1可能作为其潜在靶基因介导铁死亡抵抗.
