目的 建立测定人血浆中多黏菌素B总浓度的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）方法，并应用于临床多黏菌素B的治疗药物监测。方法 采用Welch Ultimate LP-C18（100 mm×2.1 mm,5μm）色谱柱对多黏菌素B的主要成分进行色谱分离，建立时间程序为4.0 min的LC-MS/MS法，以乙腈为沉淀剂进行蛋白沉淀的样品前处理，用正离子扫描以及多反应监测模式进行分析物测定。结果 多黏菌素B的总浓度线性范围为100～10 000 ng·mL–1，各主要成分线性系数均＞0.996，批内和批间精密度RSD均≤6%，准确度为91.88%～114.02%，测定3例使用多黏菌素B患者的体内暴露量，AUC0-24 h分别为39.73,64.15,107.75 mg·L–1·h–1。结论 本研究建立了一种稳健的测定人血浆中多黏菌素B总浓度的LC-MS/MS方法，灵敏度和特异性好，并成功用于临床上多黏菌素B的治疗药物监测。